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细胞培养常见问题及其解决方法点击次数:671 发布时间:2017/9/30

  细胞培养常见题目及其解决
 
  1. 如何选用特殊细胞系培养基?培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很轻易生长。总之,首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。
 
  2. 何时须更换培养基?
 
  视细胞生长密度而定, 或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。
 
  3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基?
 
  不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基, 细胞大都无法立即适应, 造成细胞无法存活。
 
  4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
 
  不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
 
  5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?
 
  FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 两者都是指胎牛血清, FCS 乃错误的使用字眼, 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。
 
  6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2?或根本没有影响?
 
  一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统, 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时,细胞培养时应使用10 % CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时, 则应使用5 % CO2 培养细胞。
 
  7.Hank‘s 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用,不需要CO2培养箱。原因是什么?Hank‘s 平衡盐溶液(HBS)和Earle‘s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?
 
  HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中,溶液会变碱,Hanks液在CO2培养箱中会变酸。假如希看在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagles液,。假如仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks液就可以了。
 
  8. 细胞之接种密度为何?
 
  依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。
 
  9. 悬浮性细胞应如何继代处理?
 
  一般仅需持续加进新鲜培养基于原培养角瓶中, 稀释细胞浓度即可, 若培养液太多时, 可将培养角瓶口端稍微抬高, 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶, 加进新鲜培养基稀释至适当浓度, 重复前述步骤即可。
 
  10.冷冻管应如何解冻?
 
  取出冷冻管后, 须立即放进37 °C 水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并留意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须留意安全, 预防冷冻管之爆裂。
 
  11. 细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上往除DMSO?
 
  除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 尽大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在解冻之后, 应直接放进含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中, 待隔天再置换新鲜培养基以往除DMSO 即可, 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之题目。
 
  12. 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度?应如何处理?
 
  一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中, 保存于–20 °C,避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低, 并可减少污染之机会。
 
  13.欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?
 
  欲回收动物细胞, 其离心速率一般为300xg (约1,000rpm),5 - 10 分钟, 过高之转速, 将造成细胞死亡。
 
  14. 细胞冷冻培养基之成份为何?
 
  动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。留意:由于DMSO 稀释时会放出大量热能, 故不可将DMSO 直接加进细胞液中, 必须使用前先行配制完成。
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